冷(leng)凍(dong)研磨(mo)儀對(dui)樣品(pin)RNA研磨(mo)提取(qu)的整體操(cao)作流程
2019-09-18 08:59:55
其實真正要說到對樣品RNA的提取，我們之前所做的只是研磨樣品，但樣品中的成分提取卻是沒有分享過的，今天借此機會，小編就來給你剛剛冷凍研磨儀是(shi)怎樣(yang)對樣(yang)品的RNA進行(xing)提取的。
液氮(dan)研(yan)(yan)磨(mo)儀人性化(hua)設(she)計，經久耐(nai)用，操作簡單(dan)。廣泛應用于(yu)生物化(hua)學(xue)，動植物學(xue)，醫學(xue)，礦物學(xue)，材料學(xue)等行業領域中(zhong)。選用電磁沖(chong)擊(ji)(ji)技術粉碎(sui)研(yan)(yan)磨(mo)樣(yang)品(pin)，將裝有樣(yang)品(pin)的(de)研(yan)(yan)磨(mo)罐放到液氮(dan)預冷幾分鐘，利(li)用電磁驅動鋼沖(chong)擊(ji)(ji)器在超低溫環境下來回沖(chong)擊(ji)(ji)樣(yang)品(pin)，從而快速(su)徹底的(de)研(yan)(yan)磨(mo)樣(yang)品(pin)。與傳(chuan)統研(yan)(yan)磨(mo)相比，這種(zhong)獨特的(de)研(yan)(yan)磨(mo)方(fang)式所需時間更短，樣(yang)品(pin)研(yan)(yan)磨(mo)更細。在樣(yang)品(pin)的(de)研(yan)(yan)磨(mo)過程在，不僅避免了樣(yang)品(pin)之間的(de)交叉(cha)污染，還(huan)能滿足(zu)不同(tong)客戶的(de)各種(zhong)研(yan)(yan)磨(mo)需求，是公認的(de)“研(yan)(yan)磨(mo)手段”。
冷凍研磨儀對樣本RNA的提取：
1．實(shi)驗操作臺、移液槍、槍頭盒、管(guan)架等實(shi)驗用品需要使用百分之75的乙醇滅(mie)菌，然后再(zai)擦拭上述研磨器(qi)具(ju)。
2.取出儲(chu)存在零(ling)下(xia)80度冰(bing)箱中的組織(zhi)塊，放入預(yu)冷過的研缽(bo)中，破碎組織(zhi)塊，研磨成粉(fen)(fen)末狀，再(zai)使用勺(shao)子將粉(fen)(fen)末轉(zhuan)移到離心管內。
3、待液氮(dan)揮發完(wan)，加入裂(lie)解(jie)液，用移液管吹散細(xi)胞(bao)，確保(bao)細(xi)胞(bao)至完(wan)全裂(lie)解(jie)。如(ru)有必(bi)要(yao)，可(ke)以(yi)使用水平振(zhen)蕩(dang)器將(jiang)它(ta)們(men)均勻混合。在借用離心機使其離心，沉淀。
4、再(zai)加(jia)入三氯(lv)甲烷，比例(li)為200微升三氯(lv)甲烷/毫(hao)升三唑，將其倒(dao)置(zhi)混合，并在(zai)室溫下放置(zhi)存放15分(fen)鐘左右。
5、在使用(yong)離心(xin)機將其(qi)離心(xin)15分鐘左(zuo)右，取(qu)上清(qing)液，注(zhu)意是吸取(qu)上層，不要觸碰中(zhong)層或下(xia)層。在零下(xia)20℃的環境下(xia)加入(ru)等體積異丙醇進行(xing)沉淀1小時。
6、在使(shi)用離心機(ji)將(jiang)其離心10分鐘左右，加入1ml百分之75的酒精(jing)漂洗沉淀，再使(shi)用離心機(ji)將(jiang)其離心5分鐘左右。如有需要，可重(zhong)復使(shi)用酒精(jing)漂洗。
7、棄(qi)掉上清液(ye)，可以選擇再(zai)次(ci)離(li)心去除殘留的乙醇，在安(an)全柜中沉淀干(gan)燥，但不要(yao)過度干(gan)燥，只需將乙醇蒸發完即可。
8、根(gen)據(ju)樣品沉淀(dian)物的(de)大小，用無(wu)核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)酶的(de)水充分溶(rong)解核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)沉淀(dian)物。選(xuan)用溶(rong)解沉淀(dian)量，測定(ding)RNA的(de)濃度。
9、用電(dian)泳檢測(ce)RNA的(de)完整(zheng)性，110V電(dian)泳30分鐘左右(you)，沉積(ji)物(wu)最終(zhong)存放在零下80度的(de)低溫(wen)冰箱中。
這就是(shi)一個整(zheng)體的對(dui)樣(yang)(yang)品RNA提取的一個操作流程(cheng)，雖(sui)然過(guo)程(cheng)有些(xie)麻煩，但結果(guo)總是(shi)令人驚喜，有這樣(yang)(yang)一個研磨幫(bang)手，真的是(shi)研磨快速(su)高效了好多好多。
